--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱： OCI-LY3(人彌漫大B細胞淋巴瘤細胞)

細胞別稱： OCI-LY3; OCI-ly3; OCI-LY-3; Oci-Ly-3; OCI-Ly 3; OCILY-3; OCI-Ly03; OCI Ly3; OCILY3; Ly3; LY3

細胞貨號： SNL-226

生長特性： 懸浮

培養(yǎng)條件： 1640+20% FBS+1% P/S

培養(yǎng)環(huán)境： 空氣，95%； 二氧化碳 (CO2)，5%；37℃

細胞簡介： OCI-LY3細胞于1983年從一名復發(fā)時患有B細胞非霍奇金淋巴瘤（B-NHL，彌漫性大B細胞淋巴瘤，DLBCL，4B期）的52歲男性骨髓樣本中建立，是一種激活型的B淋巴細胞。OCI-LY3細胞在文獻中描述為EBV陰性，缺乏典型的t（8；14）易位。OCI-LY3細胞HBV、HCV、HIV-1、HIV-2、MLV均呈陰性。

細胞正常生長形態(tài)照片

OCI-LY3細胞培養(yǎng)注意事項

l OCI-LY3細胞大部分聚集成葡萄串狀懸浮生長，細胞團較大時需要吹打成小團，防止團塊中間的細胞因營養(yǎng)不足而死亡，小團塊無需處理。除非實驗需要，不建議將細胞吹散成單個細胞。

l OCI-LY3細胞對血清要求高，應該使用優(yōu)質血清進行培養(yǎng)，血清比例為20%；

l 隨著培養(yǎng)時間增加，會有部分細胞貼壁伸展的情況，傳代時可以輕輕吹打細胞貼壁面，吹下的細胞可以正常傳代，未吹下的細胞無需收集。

l 該細胞培養(yǎng)過程存在密度依賴的情況，細胞密度建議維持在1E5-5E5/ml之間，密度過低或者過高可能會影響細胞狀態(tài)；

OCI-LY3細胞換液方法

l 半換液法：

1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）

2. 將培養(yǎng)瓶靜置5-10min，待細胞沉底；（肉眼觀察細胞沉底情況）

3. 吸頭緊貼液體表面，小心吸出一半的培養(yǎng)基，轉移到離心管；

4. 900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細胞，則用新鮮培養(yǎng)基重懸后放回原瓶；

5. 原瓶補充一半的新鮮培養(yǎng)基。

l 離心換液法：

1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）

2. 將所有細胞懸液轉移至離心管中；

3. 900-1000rpm，3min離心；

4. 培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；

5. 離心完成后棄上清，加適量新鮮培養(yǎng)基輕輕重懸細胞沉淀，將細胞懸液接種回培養(yǎng)瓶中，混勻細胞，放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

OCI-LY3細胞傳代方法

l 離心法：

1. 準備所需的培養(yǎng)基、離心管以及無菌槍頭等；（培養(yǎng)基提前預熱）

2. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶內細胞懸液轉移至離心管中；

3. 900-1000rpm，3min離心收集細胞；

4. 在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）

5. 離心完成后，棄離心管內上清，然后加入適量新鮮培養(yǎng)基，輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至若干個新的培養(yǎng)瓶中，輕輕混勻后將細胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

l 直接分瓶法：

1. 輕輕將細胞吹散成小團并混勻。

2. 用移液器吸取培養(yǎng)瓶內細胞懸液，均分到若干個新培養(yǎng)瓶中，每瓶再補充適量的新鮮培養(yǎng)基，輕輕混勻后將細胞放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

Tips：

l 注意控制吹打力度盡可能輕柔，吹打次數不要過多，避免細胞受機械損傷。

l 傳代比例推薦1：2

OCI-LY3細胞凍存方法

1. 準備所需的培養(yǎng)基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無菌槍頭等；（試劑需提前預熱）

Tips：若凍存前培養(yǎng)基已經變黃，先換液靜置培養(yǎng)4h左右，待細胞活力穩(wěn)定后再進行凍存。

2. 根據收集到細胞量，配制相應量的凍存液，并準備相應數量的凍存管，在凍存管上標志細胞名稱，代次，凍存時間等信息。推薦凍存液配方：92%FBS+8%DMSO或92%完*培養(yǎng)基+8%DMSO；凍存密度300萬細胞/mL/管。

Tips：凍存密度過低將導致復蘇后狀態(tài)不佳。

3. 將細胞懸液轉移至離心管中1000rpm，3min離心收集細胞；

4. 離心完成后棄上清，加入相應量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞，將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產生過多氣泡；

Tips：加入凍存液混勻細胞后及時分裝并將細胞降溫凍存，以減少DMSO對細胞的毒性。

5. 將細胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉移至-80℃冰箱進行降溫凍存。

6. 次日（16h-24h后）復蘇一管檢查凍存效果，確認沒問題后及時將凍存細胞放置液氮中保存，細胞在-80℃冰箱放置時間不要超過3天。

OCI-LY3細胞復蘇方法

1. 提前將水浴鍋預熱至37℃，培養(yǎng)基復溫至室溫或37℃，離心機設置好轉速；

2. 將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完*融化，融化時間不超過2min；

Tips：

l 若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

l 水浴時使用一次性PE手套包住凍存管避免直接接觸水源，避免污染。

3. 直接將凍存管900-1000rpm 2min離心，同時在培養(yǎng)瓶中加入適量新鮮培養(yǎng)基；

4. 離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養(yǎng)基（建議血清濃度提高至20%）輕輕重懸細胞，吹散細胞后接種到培養(yǎng)瓶中；

5. 使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

Tips：整個細胞復蘇過程在盡可能5-10min內完成。

OCI-LY3細胞收貨攻略

1. 拆封包裝盒，確認細胞，說明書等是否齊全，收貨細胞名與所購買細胞是否符合；

2. 觀察細胞培養(yǎng)瓶是否完好，有無漏液，培養(yǎng)瓶內培養(yǎng)基是否有肉眼可見的絮狀物或者渾濁等，發(fā)現異常及時拍照聯(lián)系銷售人員；

3. 確認無異常后，將培養(yǎng)瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養(yǎng)箱平衡4h左右，讓懸浮細胞沉下培養(yǎng)瓶底部；

4. 平衡過程中可以仔細閱讀細胞說明書，知悉細胞所需培養(yǎng)體系，培養(yǎng)環(huán)境以及培養(yǎng)注意事項等；

5. 平衡完成后豎立取出細胞培養(yǎng)瓶，此時大部分細胞沉在培養(yǎng)瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養(yǎng)基在培養(yǎng)瓶內，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細胞；

6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養(yǎng)瓶底部的細胞，上清可以4℃保存，后續(xù)用于培養(yǎng)細胞，以平穩(wěn)過度到自己的培養(yǎng)基。將收集到的細胞接種至原培養(yǎng)瓶；

7. 觀察細胞，根據細胞狀態(tài)，以及團塊數量、大小決定傳代或繼續(xù)培養(yǎng)。

常見問題及解決方案

培養(yǎng)過程中細胞碎片較多怎么處理？

1. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現象，只是不同細胞顆粒多少有區(qū)別，細胞培養(yǎng)體系不適應、營養(yǎng)缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加，建議使用合適的培養(yǎng)條件。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產物，可通過800rpm，3min低速離心以去除部分碎片。少量碎片不影響細胞生長，不建議頻繁離心。

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