同學(xué)們有沒(méi)有遇到這種情況:辛辛苦苦培養(yǎng)了一批貼壁細(xì)胞,正準(zhǔn)備美美地做實(shí)驗(yàn),有一天突然發(fā)現(xiàn)細(xì)胞變少了!細(xì)胞并不是消失了,而是在培養(yǎng)液中大量漂浮著,像一群失去了方向的氣球。你不知道該怎么辦,只能無(wú)奈地看著細(xì)胞越養(yǎng)越少。別擔(dān)心,小尚會(huì)告訴你原因和解決方法,建議速速放入收藏夾以備不時(shí)之需!
首先,同學(xué)們需要了解,細(xì)胞漂浮是一個(gè)很常見(jiàn)的現(xiàn)象,細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)有部分漂浮但細(xì)胞仍然正常生長(zhǎng),這種情況無(wú)需特殊處理。特別是呈島狀生長(zhǎng)的細(xì)胞,漂浮細(xì)胞看起來(lái)會(huì)比較多,保持2-3天換液一次即可,換液的同時(shí)漂浮細(xì)胞順便也被清除了。
但如果細(xì)胞突然大量漂浮,貼壁的部分明顯減少,細(xì)胞不再生長(zhǎng),則需要按照下面的內(nèi)容排查原因并正確處理。
看起來(lái)漂浮細(xì)胞較多,但貼壁細(xì)胞正常生長(zhǎng),并沒(méi)有受到影響,正常培養(yǎng)即可
細(xì)胞大量異常漂浮,貼壁細(xì)胞狀態(tài)不佳,需排查原因
1. 溫度影響
細(xì)胞不能著涼哦!貼壁比較弱的細(xì)胞如果遇到了冷的環(huán)境,會(huì)皺縮甚至脫落,換液等操作之前必須將培養(yǎng)基、PBS等試劑置于37度充分預(yù)熱。細(xì)胞不能靠近冰冷的物品,不要將剛從冰箱拿出的物品放在細(xì)胞旁邊。冬季尤其需要注意,未開(kāi)空調(diào)的細(xì)胞房氣溫較低,細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱觀察的時(shí)間不能太長(zhǎng),否則長(zhǎng)時(shí)間在低溫環(huán)境下細(xì)胞也容易皺縮脫落。盡量控制觀察次數(shù),不要太頻繁。
2. 傳代操作的影響
若消化操作不當(dāng),細(xì)胞極易受損,最終死亡漂浮。細(xì)胞在傳代消化的時(shí)候應(yīng)該注意中和的時(shí)機(jī)。一般消化時(shí)每隔30s-1min拿出觀察,直到部分細(xì)胞能自然脫落時(shí)再終止消化。避免消化不C底,強(qiáng)行將細(xì)胞吹下造成損傷,同時(shí)也避免消過(guò)度造成損傷。中和吹打時(shí)注意槍頭不要與細(xì)胞層接觸,離心重懸時(shí)吹打次數(shù)不宜過(guò)多,力度要輕柔,吹打時(shí)可留少許液體在槍頭內(nèi),避免產(chǎn)生氣泡。
終止消化的時(shí)機(jī)
(重懸吹打教學(xué)視頻)
3. 培養(yǎng)基與血清的影響
若培養(yǎng)基、血清等培養(yǎng)試劑開(kāi)封時(shí)間較長(zhǎng),培養(yǎng)箱CO2供氣異常等情況,可能導(dǎo)致培養(yǎng)基pH值、滲透壓異常、細(xì)胞因子降解等種種問(wèn)題,從而導(dǎo)致細(xì)胞漂浮。
建議培養(yǎng)試劑開(kāi)封后正確分裝儲(chǔ)存,并盡快使用。
血清對(duì)細(xì)胞貼壁起著至關(guān)重要的影響,血清不合適也可能導(dǎo)致細(xì)胞過(guò)多漂浮,此時(shí)應(yīng)嘗試不同品牌的血清,選擇出最合適的血清進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)。
CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱要定期維護(hù),保證細(xì)胞生長(zhǎng)環(huán)境穩(wěn)定。
4. 細(xì)胞密度影響
細(xì)胞密度過(guò)低或過(guò)高都可能影響細(xì)胞貼壁,過(guò)低時(shí)細(xì)胞生長(zhǎng)減慢甚至無(wú)法生長(zhǎng)最終漂浮;細(xì)胞長(zhǎng)滿后未及時(shí)傳代,長(zhǎng)時(shí)間高密度培養(yǎng),細(xì)胞將會(huì)受損漂浮。因此要注意接種密度不要過(guò)低,密度至80%及時(shí)傳代。
密度過(guò)低
密度過(guò)高
5. 培養(yǎng)器皿的影響
一般來(lái)說(shuō),培養(yǎng)貼壁細(xì)胞需要使用表面處理過(guò)的器皿。所謂表面處理,就是通過(guò)特定的方法使器皿底部具有親水性,有效提高細(xì)胞的貼壁性,大家購(gòu)買培養(yǎng)器皿的時(shí)候需要多多留心。如果細(xì)胞貼壁太弱了,一碰就脫落,可以嘗試用多聚賴氨酸、膠原蛋白等物質(zhì)包被培養(yǎng)器皿,以增加細(xì)胞貼壁牢固度。
總之,如果發(fā)現(xiàn)細(xì)胞大量異常漂浮,排查原因并盡快處理通常可以解決。
希望這篇文章對(duì)你有所幫助!
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