欧美综合缴情五月丁香六月婷,国产影片中文字幕,精品人妻无码一区二区色欲产成人,久久精品亚洲AV无码四区

您的位置: 首頁 > 技術文章 > l02細胞進行復蘇的原則及步驟

l02細胞進行復蘇的原則及步驟

更新時間:2021-06-22瀏覽:624次

  l02細胞復蘇的原則:快速融化:需要將凍存在-196℃液氮中的細胞快速融化至37℃,使細胞外凍存時的冰晶迅速融化,避免冰晶緩慢融化時進入細胞形成再結晶,對細胞造成損害。
  (一)實驗前準備:
  1、將水浴鍋預熱至37℃
  2、用75%酒精擦拭紫外線照射30min的超凈工作臺臺面。
  3.、在超凈工作臺中按次序擺放好消過毒的離心管、吸管、培養瓶等等4、將RPMI1640培養液、胎牛血清、從4℃冰箱拿出5、配制適量含10%的胎牛血清及青蓮霉素混合液(1×)的*培養液放入4℃冰箱內備用。
  (二)細胞復蘇:
  1.取液氮中凍存細胞,于37C水浴鍋中不斷的搖動,使管中的液體在1min內迅速融化,取出用酒精棉球擦拭凍存管的外壁,拿入超凈臺內,將凍存管內細胞吹打混勻后吸入10m1離心管內,緩慢加入5-8ml含胎牛血清和青鏈霉素的*培養液。
  2.離心機內配平離心,1000r/min離心5min,吸棄上清液,將剩余細胞吹打混勻制成懸液轉移入培養瓶內,加入*培養液6ml,將培養瓶放入37℃和5%C02的培養箱內孵育。
  l02細胞消化及傳代:
  1.從培養箱內取出細胞:注意取出細胞時要旋緊瓶蓋,用酒精棉球擦拭顯微鏡的臺面,再在鏡下觀察細胞。打開瓶口:將各瓶口一一打開,同時要在酒精燈上燒口消毒。
  2.小心吸出舊培養液,用PBS沖洗兩遍后,加入適量消化液(EDTA胰蛋白酶液),注意消化液的量以蓋住細胞。顯微鏡下觀察細胞:若胞質回縮,細胞之間不再連接成片,表明此時細胞消化適度。
  3.加入5ml培養液終止消化,用滴管將已經消化細胞吹打成細胞懸液吸細胞懸液入離心管:將細胞懸液吸入10ml離心管中。平衡離心:平衡后將離心管放入臺式離心機中,以1000轉/分鐘離心5分鐘。

 

聯系我們
  • QQ:1242926414
  • 郵箱:1242926414@qq.com
  • 傳真:86-027-87800889
  • 地址:武漢東湖新技術開發區高新二路388號武漢光谷國際生物醫藥企業加速器1.2期C22棟二層

掃一掃,關注公眾號

©2024 武漢尚恩生物技術有限公司 版權所有    備案號:鄂ICP備2020018368號-2    技術支持:化工儀器網    Sitemap.xml    總訪問量:132753    管理登陸