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3T3L1小鼠胚胎成纖維細胞3T3L1細胞系

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二、細胞培養操作說明

1.細胞培養需要充足經驗，新手或者沒有類似細胞培養經驗的人建議在專業人士指導下進行操作，尤其注意無菌操作、貼壁細胞消化時間及細胞培養密度。

2.部分細胞在傳代后時，會有以下現象：細胞內會有黑色小點、細胞間隙有些顆粒物、培養基漂浮一些死細胞。以上都是細胞培養常見現象，不影響細胞增殖和實驗。

3.細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡、細胞器折光或者細胞膜表面物質，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細胞庫細胞照片。細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片，可以吸走培養基后用PBS潤洗；潤洗不能清除的可以消化細胞重新接種，消化完成后加*培養基終止消化，混勻細胞，收集細胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min，棄上清。再加5ml PBS重懸細胞，再離心后，用*培養基重懸接種到新的培養皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片，如果平時碎片比較少，傳代時可以省略PBS重懸的步驟；如果碎片很多，建議PBS多洗幾次。

4.不同品牌胰m溶液成分不一樣，消化活性差別比較大，更換胰m品牌時需重新摸索消化時間，以消化到細胞間隙變大但未漂浮為準，此時結束消化最佳，避免消化過度導致細胞死亡。細胞消化后比較脆弱，吹打力度不要過大，不要產生過多氣泡，否則會嚴重影響細胞狀態。

5.不同細胞生長速度差異較大，所有細胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養時生長較慢、密度較低的細胞需要傳代時按1:2傳代，生長較快、密度較高的細胞可以按1:4傳代。

6.細胞生長偏慢時，可以將血清濃度增加到15-20%培養一段時間，待細胞狀態和生長速度恢復正常后換回10%血清。

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