簡要描述:HFL1人胚肺成纖維細(xì)胞HFL1細(xì)胞系細(xì)胞名稱人胚肺成纖維細(xì)胞細(xì)胞別稱HFL1; HFL-1; HFL 1; Human fetal lung fibroblast 1; HFL細(xì)胞貨號SNL-017細(xì)胞種屬人生長情況貼壁
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品牌 | 其他品牌 | CAS | 詳見說明書 |
---|---|---|---|
分子式 | 詳見說明書 | 純度 | 詳見說明書 |
分子量 | 詳見說明書 | 貨號 | SNL-018 |
規(guī)格 | T25瓶 | 供貨周期 | 現(xiàn)貨 |
主要用途 | 實驗 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工,生物產(chǎn)業(yè),能源 |
生長情況 | 貼壁 |
-----尚恩生物 I8627859203------
HFL1人胚肺成纖維細(xì)胞HFL1細(xì)胞系
HFL1人胚肺成纖維細(xì)胞HFL1細(xì)胞系
培養(yǎng)環(huán)境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、收貨處理方式(T25瓶/凍存管)
【T25】
①快遞保存溫度:室溫
②初步平衡:T25瓶表面消毒后,放37度培養(yǎng)箱平衡復(fù)溫2h以上
③處理方式:吸走大部分培養(yǎng)基,留10-12ml培養(yǎng)基,拍照并觀察細(xì)胞。密度80%以上即可吸走培養(yǎng)基消化傳代,若密度低于80%可以留10-12 ml繼續(xù)培養(yǎng)至細(xì)胞密度80%以上
④接種方式:T25傳代第①次建議1:2傳代,即瓶T25傳成兩瓶
⑤注意事項:若細(xì)胞出現(xiàn)漂浮,T25瓶不開封,放至37度培養(yǎng)箱過夜,若細(xì)胞貼壁即說明活性正常,按正常操作消化傳代即可;若未貼壁,收集細(xì)胞培養(yǎng)基離心后,將細(xì)胞重懸接種到新的培養(yǎng)瓶中,同時原瓶還貼壁的細(xì)胞加培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)
發(fā)貨T25瓶裝滿大約有75ml培養(yǎng)基,可以收集起來,1500rpm離心5min后,取上清4度保存,用于培養(yǎng)細(xì)胞,以平穩(wěn)過渡到客戶自己的培養(yǎng)基
【凍存管】
①快遞保存溫度:液氮長期保存或-80度3天以內(nèi)
②初步平衡:無須平衡,直接放入-80冰箱或者液氮罐保存
③處理方式:37度水浴搖晃盡快融化細(xì)胞,直接在凍存管內(nèi)將細(xì)胞離心。離心轉(zhuǎn)速以離心力150g(約900rpm)左右,1min為宜,棄上清,沉淀用新鮮培養(yǎng)基重懸后接種到10cm培養(yǎng)皿,顯微鏡下觀察細(xì)胞并拍照,24h后換液一次
④接種方式:一管細(xì)胞建議接種到10cm培養(yǎng)皿或者T25瓶
⑤注意事項:收貨時若發(fā)現(xiàn)干冰化完,檢查凍存管是否融化,若已融化需直接離心細(xì)胞接種觀察,若未融化可以將細(xì)胞按正常步驟保存,以上情況及時反饋
干冰發(fā)貨的細(xì)胞只能在-80保存3天左右,長時間保存會出現(xiàn)活性下降。干冰發(fā)貨均為兩支,客戶先復(fù)蘇一支,若復(fù)蘇失敗及時聯(lián)系我方并在我方指導(dǎo)下復(fù)蘇第二支。若客戶同時復(fù)蘇兩支均狀態(tài)不佳,我方將不提供免費售后服務(wù)
特殊情況:
1.若培養(yǎng)瓶或者凍存管出現(xiàn)破碎或漏液情況,及時拍照聯(lián)系銷售反饋,按指導(dǎo)進(jìn)行進(jìn)一步處理。若只是外包裝破損一般不影響培養(yǎng)瓶和凍存管,請放心使用。
2.若無法觀察到細(xì)胞,建議收集細(xì)胞培養(yǎng)基,1200rpm離心5min,觀察細(xì)胞沉淀量,并用少量培養(yǎng)基重懸沉淀后,取部分懸液放到計數(shù)板或者載玻片上觀察細(xì)胞。
3.部分細(xì)胞增殖較快,發(fā)貨細(xì)胞量較多時,培養(yǎng)基可能出現(xiàn)顏色變黃現(xiàn)象。繼續(xù)培養(yǎng)使用此類培養(yǎng)基時,需要及時觀察培養(yǎng)基顏色變化,縮短培養(yǎng)基換液周期,并每瓶多加2-3ml培養(yǎng)基。
4.收貨當(dāng)天不處理細(xì)胞時,T25瓶可以消毒拆封口膜后不擰開瓶蓋放37度培養(yǎng)箱靜置過夜,但不建議超過24h;凍存管可以直接放液氮長期保存或-80度3天以內(nèi),必須一周內(nèi)復(fù)蘇一只培養(yǎng)檢查,否則將超過一周售后期。
培養(yǎng)操作說明:
1.細(xì)胞培養(yǎng)需要充足經(jīng)驗,新手或者沒有類似細(xì)胞培養(yǎng)經(jīng)驗的人建議在專業(yè)人士指導(dǎo)下進(jìn)行操作,尤其注意無菌操作、貼壁細(xì)胞消化時間及細(xì)胞培養(yǎng)密度。
2. 部分細(xì)胞在傳代后時,會有以下現(xiàn)象:細(xì)胞內(nèi)會有黑色小點、細(xì)胞間隙有些顆粒物、培養(yǎng)基漂浮一些死細(xì)胞。以上都是細(xì)胞培養(yǎng)常見現(xiàn)象,不影響細(xì)胞增殖和實驗。
3. 細(xì)胞內(nèi)的黑色顆粒是細(xì)胞外分泌泡、細(xì)胞器折光或者細(xì)胞膜表面物質(zhì),這個屬于細(xì)胞自身特性,無法清除也無法改變,具體情況可以參考ATCC、DSMZ等大型細(xì)胞庫細(xì)胞照片。細(xì)胞外的黑色顆粒大部分是細(xì)胞碎片,可以吸走培養(yǎng)基后用PBS潤洗;潤洗不能清除的可以消化細(xì)胞重新接種,消化完成后加*培養(yǎng)基終止消化,混勻細(xì)胞,收集細(xì)胞懸液900-1000rpm(約150g)離心3min,棄上清。再加5ml PBS重懸細(xì)胞,再離心后,用*培養(yǎng)基重懸接種到新的培養(yǎng)皿。第二次PBS重懸是為了去除碎片,如果平時碎片比較少,傳代時可以省略PBS重懸的步驟;如果碎片很多,建議PBS多洗幾次。
4. 不同品牌胰m溶液成分不一樣,消化活性差別比較大,更換胰m品牌時需重新摸索消化時間,以消化到細(xì)胞間隙變大但未漂浮為準(zhǔn),此時結(jié)束消化最佳,避免消化過度導(dǎo)致細(xì)胞死亡。細(xì)胞消化后比較脆弱,吹打力度不要過大,不要產(chǎn)生過多氣泡,否則會嚴(yán)重影響細(xì)胞狀態(tài)。
5. 不同細(xì)胞生長速度差異較大,所有細(xì)胞收貨后第①次傳代建議按1:2傳代。正常培養(yǎng)時生長較慢、密度較低的細(xì)胞需要傳代時按1:2傳代,生長較快、密度較高的細(xì)胞可以按1:4傳代。
6. 細(xì)胞生長偏慢時,可以將血清濃度增加到15-20%培養(yǎng)一段時間,待細(xì)胞狀態(tài)和生長速度恢復(fù)正常后換回10%血清。
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