293細胞是指來源于人類胎肺緊序細胞的一系列細胞株,具有廣泛應(yīng)用于生物醫(yī)學(xué)研究和生產(chǎn)的潛力。這些細胞起源于1973年從人類胎肺提取的一種胎兒肺腺瘤細胞。經(jīng)過多年的培養(yǎng)和傳代,這些細胞株獲得了一定的穩(wěn)定性和一致性。特點是其對病毒的易感性。研究者利用這些細胞株,可以選擇性地導(dǎo)入不同的質(zhì)粒或病毒,從而實現(xiàn)對相關(guān)蛋白的大規(guī)模表達和功能研究。此外,可以通過高效而穩(wěn)定的轉(zhuǎn)染技術(shù),用于大規(guī)模制備重組蛋白和病毒顆粒。
293細胞的存儲措施:
1.培養(yǎng)基:常用的培養(yǎng)基為DMEM高糖培養(yǎng)基,通常添加10-15%的胎牛血清(FBS)作為生長因子。培養(yǎng)基必須去除菌液,并且在4℃保存。
2.培養(yǎng)室條件:需要在無菌的培養(yǎng)室中培養(yǎng)。一般情況下,培養(yǎng)室的溫度應(yīng)保持在37℃,濕度約為95%,并且氣體控制為5%CO2和95%空氣。此外,應(yīng)定期對培養(yǎng)室進行消毒,以保持無菌環(huán)境。
3.細胞傳代:當(dāng)達到80-90%的密度時,需要進行傳代來保持細胞的正常生長。傳代時,使用無菌的PBS緩沖液洗滌細胞,然后使用0.25%胰蛋白酶-EDTA溶液將細胞從培養(yǎng)瓶中剝離,并用新的培養(yǎng)基重新分裝。
4.細胞檢測:為了確保純度和生長狀態(tài),應(yīng)定期對細胞進行檢測。可以使用顯微鏡觀察細胞形態(tài),或者進行細胞活力檢測和染色體核型分析。
5.避免污染:污染是眾多細胞培養(yǎng)實驗中常見的問題,因此必須采取措施確保不受細菌、真菌和病毒等污染。遵循無菌實驗操作程序,并對培養(yǎng)器具、試劑和培養(yǎng)基進行嚴(yán)格的消毒和清潔。
6.儲存和保存:可以在液氮中冷凍保存。在進行冷凍保存時,應(yīng)使用適當(dāng)?shù)膬龃嬉海焖倮鋬霾Υ嬗?80℃或更低溫度。在保存期間,需要定期檢查和更換培養(yǎng)條件,以確保凍存細胞的存活率。