bv2細(xì)胞是小鼠小膠質(zhì)細(xì)胞，用于測(cè)試這些小兒HGG細(xì)胞激活小膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤支持表型的能力，是組蛋白H3野生型并表達(dá)大量的H3K27的三甲基化形式，以及其乙酰化形式。可以觀察到DIPG腫瘤是由H3-K27M陽(yáng)性和陰性的細(xì)胞混合組成的，H3K27me3和H3K27ac的表達(dá)水平不一樣。對(duì)三個(gè)不同DIPG患者的腫瘤組織進(jìn)行的免疫組化分析證實(shí)，DIPG癌細(xì)胞為H3-K27M陽(yáng)性，而其微環(huán)境中表達(dá)IBA1的小膠質(zhì)細(xì)胞不攜帶該突變。我們表明，與它們的組蛋白H3狀態(tài)無(wú)關(guān)，即不論是野生型H3還是H3-K27M突變型，小兒HGG細(xì)胞都能夠使BV2小膠質(zhì)細(xì)胞向腫瘤支持型極化，這表現(xiàn)在它們能夠支持HGG癌細(xì)胞對(duì)基質(zhì)的入侵能力。
 

　　接下來(lái)，我們檢查了一氧化氮合酶-2（Nos2）基因的表達(dá)，因?yàn)槠浔磉_(dá)的誘導(dǎo)與小膠質(zhì)細(xì)胞的促炎癥表型有關(guān)，而其表達(dá)在暴露于膠質(zhì)瘤被大幅抑制。膠質(zhì)瘤細(xì)胞甚至可以有效地減少LPS誘導(dǎo)的小膠質(zhì)細(xì)胞中NOS2的表達(dá)。因此，通過(guò)抑制Nos2基因的表達(dá)進(jìn)一步說(shuō)明了小膠質(zhì)細(xì)胞腫瘤支持表型的獲得，該基因編碼誘導(dǎo)型一氧化氮合酶，是小膠質(zhì)細(xì)胞極化為免疫抑制和促進(jìn)腫瘤激活狀態(tài)的分子特征。
 

　　在bv2細(xì)胞中對(duì)H3K27me3和乙酰化H3K27（H3K27ac）富集的染色質(zhì)免疫沉淀（ChIP）進(jìn)行了分析。事實(shí)上，Nos2啟動(dòng)子上的H3K27me3數(shù)量明顯減少，這反映了一個(gè)轉(zhuǎn)錄更活躍的基因位點(diǎn)。同時(shí)，與siCtrl相比，在siEzh2小膠質(zhì)細(xì)胞中觀察到H3K27ac的富集，這與更高的轉(zhuǎn)錄激活有關(guān)，盡管并不明顯。接下來(lái)，我們調(diào)查了有效的抗腫瘤細(xì)胞因子ll1b的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)在與H3.3野生型SF188腫瘤細(xì)胞、H3-K27M SF8628或第二個(gè)患者衍生的DIPG細(xì)胞系SU-DIPG-XIII共培養(yǎng)時(shí)，這種細(xì)胞因子在小膠質(zhì)細(xì)胞中沒(méi)有被誘導(dǎo)然而，我們發(fā)現(xiàn)siEzh2小膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)的Il1b水平升高，即使與SF188腫瘤細(xì)胞共培養(yǎng)，Il1b水平仍保持不變。為了進(jìn)一步證實(shí)Il1b可能是H3K27me3的重要靶點(diǎn)，我們用炎癥源脂多糖(LPS)治療siEzh2小膠質(zhì)細(xì)胞。