小鼠心肌細胞的培養方法，可評價心肌細胞的存活狀況并鑒定心肌細胞純度。方法應用胰酶聯合膠原酶共同消化3d內C57乳小鼠心臟，臺盼藍染色判斷心肌細胞存活率，α－actin免疫熒光染色鑒定心肌細胞純度。結果利用3d內乳鼠心臟可成功培養原代小鼠心肌細胞，臺盼藍染色顯示細胞存活率大于95%，α－actin免疫熒光染色顯示心肌細胞純度達95%以上。結論嚴格控制實驗條件，可成功培養高存活率和高純度的小鼠心肌細胞。

　　小鼠心肌細胞的分離、純化和培養：

　　心肌組織的分離：取出生0～3d的乳小鼠20只，浸泡于75%的酒精中8～10s消毒后迅速送入超凈工作臺，將其固定于無菌泡沫板上，用眼科剪將乳小鼠胸骨正中偏左的皮膚剪開，用鑷子分離皮膚，充分暴露胸部，換另一把眼科剪做一縱向切口打開胸腔，盡量不要超出剪開的皮膚范圍，忌打開腹腔，以免引起污染，根據心臟的搏動，順勢將心臟擠出。

　　取心臟放入冰冷的PBS緩沖液中吹打清洗，盡量將紅細胞清洗干凈，用眼科鑷輔助眼科剪將多余的心房及周圍肺組織等去除，隨后將心臟移到另一個干凈的培養皿，將心臟剪裂2～3下（裂而不斷的程度即可），共清洗3遍。

　　心肌細胞的分離與培養：將心臟組織吸入玻璃培養瓶中，加入0.25%胰酶（含EDTA）10mL，靜置，4°C過夜（12～16h）。第2天，取出過夜的心臟組織，加入*培養液10mL，37°C恒溫水浴5min，中止胰酶的消化作用；棄去上清液，加入膠原消化液10mL（注意棄上清液時勿把心臟組織吸走）。置于37°C的恒溫水浴箱，1min用手輕搖。棄上清液，將心臟組織移入另一個培養瓶中加入12mL膠原消化液，置于37°C恒溫水浴箱上，用手輕搖30min，將上清液移入新的離心管中。重復消化3～4次，僅見絮狀樣物質即心肌組織消化*。

　　將收集的上清液離心1000r/min5min，棄上清液，加*培養液30mL，輕輕拍打管壁使得細胞懸浮于其中，隨后接種在100mm培養皿中，放于37°C、5%CO2培養箱中孵育70min，差速貼壁以除去成纖維細胞和內皮細胞等非心肌細胞。輕輕吸出細胞懸液，臺盼藍染液染色計數，根據不同的實驗目的用*培養基調整細胞密度，加入BrdU使其在培養液的終濃度為0.1mmol/L，輕輕混勻后，將其接種到在事先用多聚賴氨酸預包被處理過的6孔板中，37°C、5%CO2培養箱中孵育48h后，換無BrdU的*培養基，以后每隔48h換液1次。