--細 胞 基 本 信 息---

細胞名稱： Kasumi-1(人急性原粒細胞白血病細胞)

細胞別稱： Kasumi-1; Kasumi 1; KASUMI1; Kasumi1

細胞貨號： SNL-339

生長特性： 懸浮

培養條件： 1640+20% FBS+1% P/S

培養環境： 空氣，95%； 二氧化碳 (CO2)，5%；37℃

細胞簡介： Kasumi-1細胞從一名亞洲男性急性髓系白血病患者的外周血中分離出的成髓細胞，髓過氧化物酶陽性，顯示其髓性成熟的形態。Kasumi-1細胞是一個帶有8：21號染色體轉位的白血病細胞株，這個轉位使得AML1基因和ETO(或稱MTG8)基因串聯，使融合基因AML1-ETO(也稱作AML1-MTG或RUNX1-CBF2T1)的表達升高，因而細胞產生嵌合的AML1-ETO蛋白，這個蛋白下調CEBPA mRNA、蛋白和DNA的結合活性，而這種結合對粒性白細胞的分化是極duan重要的。Kasumi-1細胞增殖實驗顯示，培養的Kasumi-1細胞對IL-3、IL-6、G-CSF(粒細胞集落刺激因子)、GM-CSF(粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子)有響應，但對IL-1和IL-5沒有響應。在體外液體培養中分別加入二甲亞砜、G-CSF、IL-5，也沒有觀察到粒性或嗜酸性細胞的成熟。Kasumi-1細胞培養過程中，加入佛波酯可以誘導出的巨噬細胞樣細胞。Kasumi-1細胞可以用于3D細胞培養、免疫系統紊亂研究、免疫學研究。

細胞正常生長形態照片

Kasumi-1細胞培養注意事項

l Kasumi-1細胞呈懸浮圓形生長或聚團生長。

l 圓形透亮、細胞膜完整的細胞是活細胞，如果無法判斷，可以取少量細胞用臺盼藍染色后計數確定細胞活率。

l 接種密度建議在50萬細胞/mL左右為宜，密度過低或過高都可能造成細胞狀態變差；培養至80萬細胞/mL密度時即可傳代，推薦傳代比例1：2。

l 培養時存在部分細胞碎片是正?，F象， 若碎片比較多，可以待細胞密度較大時通過低速離心（900rpm，3min）去除部分碎片； 若碎片不多，則無需特殊處理；細胞密度低時不要離心去碎片，應該等細胞增殖到可以傳代的密度再離心。

l Kasumi-1細胞生長速度較慢，需耐心培養。培養體系中血清含量為20%，不建議降低血清比例。生長環境保持穩定，少觀察，少操作。

l 當細胞狀態較差時，不建議對細胞進行離心，需換液時可采用半換液法（詳細步驟見下文）。

l Kasumi-1細胞凍存難度較大，建議使用高血清比例凍存液配方凍存細胞，凍存密度不可過低，推薦200-300萬細胞/mL/管，以提高復蘇活率。

l 

Kasumi-1細胞換液方法

l 半換液法：

1. 準備所需的培養基、離心管以及無菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2. 將培養瓶豎立靜置10min，待細胞沉底；（肉眼觀察細胞沉底情況）

3. 小心吸出一半的培養基，轉移到離心管；

4. 900-1000rpm 3min離心，離心管里若有細胞，則用新鮮培養基重懸后放回原瓶；

5. 原瓶補充一半的新鮮培養基，混勻細胞，放入培養箱中繼續培養。

l 離心換液法：

1. 準備所需的培養基、離心管以及無菌槍頭等；（培養基提前預熱）

2. 將所有細胞懸液轉移至離心管中；

3. 900-1000rpm，3min離心；

4. 培養瓶中加入適量新鮮培養基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）

5. 離心完成后棄上清，加適量新鮮培養基輕輕重懸細胞沉淀，將細胞懸液接種回培養瓶中，混勻細胞，放入培養箱中繼續培養。

Kasumi-1細胞傳代方法

l 離心法：

1.取少量細胞懸液進行計數確定細胞密度，密度80萬/mL以上傳代，并根據計數結果確定傳代比例；

2.準備所需的培養基、離心管以及無菌槍頭等；（培養基提前預熱）

3.用移液器吸取培養瓶內細胞懸液轉移至離心管中；

4.900-1000rpm，3min離心收集細胞；

5.在培養瓶中加入適量新鮮培養基；（T25推薦10mL，T75推薦20mL）

6.離心完成后，棄離心管內上清，然后加入適量新鮮培養基，輕輕重懸吹散細胞，將細胞懸液均勻接種至培養瓶中，輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

Tips：懸浮細胞通常都偏脆弱，注意控制吹打力度盡可能輕柔和離心轉速以及時間不要過高，避免細胞受機械損傷。

l 直接分瓶法：

1. 取少量細胞懸液進行計數確定細胞密度，密度80萬/mL以上傳代，并根據計數結果確定傳代比例；

2. 輕輕搖晃培養瓶，使細胞均勻分散；

3. 用移液器吸取培養瓶內細胞懸液，均分到若干個新培養瓶中，每瓶再補充適量的新鮮培養基，輕輕混勻后將細胞放入培養箱中繼續培養。

Kasumi-1細胞凍存方法

1. 取少量細胞懸液進行計數確認細胞密度。

Tips：若凍存前培養基已經變黃，先換液靜置培養4h左右，待細胞活力穩定后再進行凍存。

2. 準備所需的培養基、PBS、血清、DMSO、離心管以及無菌槍頭等；（試劑需提前預熱）

3. 根據收集到細胞量，配制相應量的凍存液，并準備相應數量的凍存管，在凍存管上標志細胞名稱，代次，凍存時間等信息。推薦凍存液配方：92%FBS+8%DMSO或92%完quan培養基+8%DMSO；凍存密度200-300萬細胞/mL/管。

Tips：凍存密度過低將導致復蘇后狀態不佳。

4. 將細胞懸液轉移至離心管中1000rpm，3min離心收集細胞；

5. 離心完成后棄上清，加入相應量的配置好的凍存液輕輕重懸混勻細胞，將細胞懸液分裝至凍存管中。注意吹打力度，不要產生過多氣泡；

Tips：加入凍存液混勻細胞后及時分裝并將細胞降溫凍存，以減少DMSO對細胞的毒性。

6. 將細胞放置程序降溫凍存盒中，再將凍存盒轉移至-80℃冰箱進行降溫凍存。

7. 次日復蘇一管檢查凍存效果，確認沒問題后及時將凍存細胞放置液氮中保存，細胞在-80℃冰箱放置時間不要超過3天。

Kasumi-1細胞復蘇方法

1. 提前將水浴鍋預熱至37℃，培養基復溫至室溫或37℃，離心機設置好轉速；

2. 將凍存細胞從液氮或-80℃冰箱中取出，迅速置于37℃水浴，快速搖晃至完quan融化，融化時間1min左右；

3. 直接將凍存管900-1000rpm 2min離心，同時在培養瓶中加入適量新鮮培養基；

4. 離心完成后棄上清，吸取1mL新鮮培養基輕輕重懸細胞，吹散細胞后接種到培養瓶中；

5. 使用十字法或8字法將細胞混勻后置于培養箱中培養。

Tips：

1. 若液氮或冰箱距離細胞房較遠，細胞需要放在干冰或冰盒上運送至細胞房。

2. 細胞融化后需盡快離心去除DMSO。

3. 整個細胞復蘇過程在盡可能5-10min內完成。

Kasumi-1細胞收貨攻略

1. 拆封包裝盒，確認細胞，說明書等是否齊全，收貨細胞名與所購買細胞是否符合；

2. 觀察細胞培養瓶是否完好，有無漏液，培養瓶內培養基是否有肉眼可見的絮狀物或者渾濁等，發現異常及時拍照聯系銷售人員；

3. 確認無異常后，將培養瓶表面消毒，然后撕掉封口膜豎立放入培養箱平衡4h左右，讓懸浮細胞沉下培養瓶底部；

4. 平衡過程中可以仔細閱讀細胞說明書，知悉細胞所需培養體系，培養環境以及培養注意事項等；

5. 平衡完成后豎立取出細胞培養瓶，此時大部分細胞沉在培養瓶底部，小心吸取上清至離心管中，保留10mL左右培養基在培養瓶內，小心操作，盡量不要吸到沉在底部的細胞；

6. 將離心管1200rpm，5min離心收集未沉下培養瓶底部的細胞，上清可以4℃保存，后續用于培養細胞，以平穩過度到自己的培養基。將收集到的細胞接種至原培養瓶；

7. 輕輕混勻細胞，取100-200ul細胞懸液進行計數，根據計數結果調整細胞培養密度。然后置于培養箱中培養。

常見問題及解決方案

細胞密度怎么計算的？

嚴格意義上，細胞密度需要收集細胞懸液計數細胞數量，但在實際培養過程中，并不需要為了精確控制細胞數量而計數。因此，常用的細胞密度指細胞相對于最大生長密度的比值，貼壁細胞可以粗略的用細胞所占培養容器底面積百分比表示，即顯微鏡下觀察培養容器底部，有細胞的區域占總區域的百分比值，當然這種表達方式受限于單個細胞生長不同密度時所占面積不同導致并不嚴謹，但也是相當直觀、簡便的表現細胞狀態的一種方式。

NO.2培養過程中細胞碎片較多怎么處理？

1. 細胞內的黑色顆粒是細胞外分泌泡及細胞器折光，這個屬于細胞自身特性，無法清除也無法改變，大部分細胞都會有這種現象，只是不同細胞顆粒多少有區別，細胞培養體系不適應、營養缺乏、滲透壓異常等均可能導致細胞內顆粒增加，建議使用合適的培養條件。

2. 細胞外的黑色顆粒大部分是細胞碎片和細胞代謝產物，可通過900-1000rpm，3min離心以去除部分碎片。少量碎片不影響細胞生長，不建議頻繁離心。

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