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細胞容易污染?如何正確凍存細胞

更新時間:2022-06-15瀏覽:952次

隨著實驗室細胞培養的發展,除了原代培養之外,還將建立開發或獲得眾多的細胞系。每一個細胞系均擴大了其起源細胞的應用,成為有價值的資源。若該細胞系頗為*,則其可能是不可替換的;替換至少也是昂貴與耗時的。因此,必須通過保存細胞系來保證這種重要投資。


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由于培養早期傳代培養的選擇,有限細胞系的衰老以及連續細胞系的遺傳和表現不穩定性,使細胞系在連續培養時有變異傾向。

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此外,即使在管理好的實驗室中也有可能發生儀器故障和污染。交叉污染以及錯誤辨識的發生率也很高。因此,存在諸多理由進行冷凍儲存細胞,總體概述有幾大不得不凍存細胞的理由:




①由于遺傳不穩定性而導致基因漂移;

②衰老,最后導致細胞系消失;

③生長特性的轉化以及惡性相關特性的獲得;

④由于選擇和去分化導致表型的不穩定性;

⑤微生物污染;

⑥其他細胞系的交叉污染;

⑦由于操作粗心而導致的錯誤鑒別;

⑧孵育箱故障;

⑨對于保存那些不立即使用的細胞系,可節省時間和材料;

⑩需要將細胞系轉給其他使用者。

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在考慮凍存細胞之前,需滿足以下特定條件:




01

確認凍存前需證實細胞系未受污染,且確為該細胞系。盡管對于新獲得的細胞系,可以在*確認前凍存幾支,但在大量凍存前應進行*確認。


凍存時間,如果是有限細胞系,這些細胞應經5代倍增生長,獲得足夠量的細胞再進行凍存。連續細胞系應將其克隆化,選擇特征性的克隆,待生長至足夠數量再進行凍存。連續細胞系有其優勢:它們可無限生長,生長比較迅速,容易克隆,但是它們缺乏遺傳穩定性。有限細胞系通?;蚪咏扼w。在一定傳代水平間是穩定的,但是,它們很難克隆,生長緩慢,最終死亡或發生轉化。

02



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