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染色凋亡試劑盒貼壁細胞的處理方法

更新時間:2022-01-10瀏覽:861次

  染色凋亡試劑盒(Hoechst 33342/PI Apoptotis Assay Kit)是一種采用Hoechst33342和碘化丙啶(Propidium lodide,PI)雙熒光染色方法進行細胞周期與細胞壞死分析的檢測試劑盒。單純的PI染色能夠觀察DNA直方圖上凋亡細胞的亞G1峰,但只能代表G0/G1期發生凋亡,無法觀察S期和G2期發生的細胞凋亡。而且,細胞經過固定后無法對活細胞和死細胞進行區分。可以穿透細胞膜,進入正常細胞和凋亡細胞,與DNA結合,能在紫外線下顯示藍色熒光,而且染色后凋亡細胞熒光會比正常細胞明顯增強。
  細胞凋亡是生物界重要的生命現象之一。從線蟲至高等的哺乳類動物,從胚胎至成人,從生理到病理,從生到死的整個過程,體內不同的細胞多具有這類死亡方式。自100多年前Carl Vogt 發現這種死亡方式到1972年Kerr等人研究并命名這種死亡為凋亡(apoptosis),其后大量有關凋亡的研究不斷深入,人們對此也不斷產生新的認識:凋亡是由基因編程調控的細胞自主過程,也是機體維持自身穩定的一種基本生理機制,是有許多基因產物及細胞因子參與的一種有序的細胞自我消亡形式。調亡過程一般可分為三個階段:誘導期、效應期和降解期。
  染色凋亡試劑盒貼壁細胞處理方法:
  1、取潔凈蓋玻片在70%乙醇中浸泡5分鐘或更長時間,無菌超凈臺內吹干或用無菌的PBS 或生理鹽水洗滌3次,再用細胞培養液洗滌1次。
  2、加入干預條件使細胞發生凋亡后,吸盡培養液,加入Hoechst 固定液0.5ml。
  3、去除固定液,用PBS或生理鹽水洗,吸盡液體。洗滌時宜用搖床,或手動晃動。
  4、加入Hoechst 33258染色液0.5ml孵育。也宜用搖床,或手動晃動數次。
  5、棄染色液,用PBS或生理鹽水洗,吸盡液體。洗滌時宜用搖床,或手動晃動。
  6、滴一滴抗熒封片劑于載玻片上,蓋上貼有細胞的蓋玻片,讓細胞接觸封片劑,盡量避免氣泡。
  7、熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。激發波長350nm左右,發射波長460nm左右。

 

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