raw264.7細胞源自Abelson鼠科白血病病毒誘導的腫瘤。sIg-,Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原陰性。此細胞株不分泌可檢測到的病毒顆粒,XC斑點形成試驗陰性。可以胞飲中性紅并吞噬乳膠顆粒與酵母聚糖??梢钥贵w依賴性地分解綿羊紅血球與腫瘤靶細胞。LPS或PPD處理2天可誘導分解紅血球但對腫瘤靶細胞無作用。
raw264.7細胞培養經驗:
1.基本情況:小鼠來源白血病毒誘導腫瘤細胞,屬于巨噬細胞,貼壁生長。下圖是ATCC來源。主流觀點是以橢圓圓形細胞為主,激活分化后才有觸角。
形態以類圓形和不規則為主,一般1--2個核,極少數有3個核,胞漿伸展時胞體較大。鏡下細胞為小珍珠似的圓形橢圓形。
2.培養情況
培養條件:10%FBS+高糖DMEN,進口gibco血清更好
傳代:細胞增殖較快,70%即可傳代,細胞有觸角也提示需要傳代,1:3----1:6傳代,推薦使用皿。傳代時切記不要使用胰酶,正常情況下此細胞貼壁不牢,直接吹打即可,胰酶消化會使細胞伸出觸角改變形態。我是直接用培養基吹打,也可以用PBS,感覺無差異。這個細胞增殖較快,培養基消耗快容易變黃,要勤換液。
凍存和復蘇:和普通細胞無異。
raw264.7細胞作為巨噬細胞有很強的吞噬能力,吞噬抗原后伸出長角,就是大家常見的偽足。同時貼壁黏附能力增強,傳代時難以消化下來。該細胞貼壁時間短,成片生長,似小菌落般小片生長,連成一片并會疊層。傳代密度不易過高或者過低,過低會導致細胞生長緩慢甚至不生長,過高,細胞會長出偽足。
3.關于RAW264.7分化,正常細胞為貼壁不牢的圓形橢圓形細胞,分化后伸出偽足,貼壁能力增強。
避免方法:
1,血清建議采用進口的真血清,
2,密度不要太高或者太低,傳代時切不可拖延時間,
3,傳代時切不可胰酶消化,直接吹打就能下來,
4,不要污染,包括其他細胞株的污染。